無血清細胞凍存液說明書

上海起發生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌，打造優質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產業鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業，共同創世界優秀的中國生物制造企業，圓夢中國。

產品詳情

 產品描述

細胞凍存是將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術，是細胞長期保存的重要手段。細胞凍存液通過冷凍保護劑在凍存過程中對細胞進行保護，以減少或防止冷凍冰晶對細胞造成的損傷。

BIOHUB 無血清細胞凍存液（藥用級）是一款采用醫用原料無血清、無需程序降溫的細胞凍存液，廣泛適用于多種哺乳動物細胞（腫瘤細胞和常規細胞）的凍存。該凍存液特別優化的配方含有雙重保護細胞的成份，從細胞內和細胞外同時保護細胞免受凍存時冰晶的損傷，大大提高了細胞的復蘇率和活力，可用于細胞長期保存。該產品配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。

與傳統凍存液相比，本產品不僅可以避免使用血清，降低血清中未知成分和病毒等感染物質給凍存帶來的影響與風險，同時，可省去繁瑣費時的程序降溫過程，細胞可重懸于本產品后直接置于-80℃冰箱長期保存，或次日轉移到液氮完成整個凍存過程。

產品性質

該產品已通過嚴格的內毒素、滲透壓、pH 測試和無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）。成分明確，極大降低批次間差異

產品特點

1、即用型細胞凍存液——優化的營養成分配方，不需要逐次用多種試劑自行配制凍存液

2、直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5 年），不需要程序性降溫

3、高安全性，病毒、病菌和支原體等污染可能性低——不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌病毒和支原體等污染

使用方法

使用方法

一 凍存細胞復蘇步驟

1. 選擇處于指數生長期的細胞，按照常規方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心 5 分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量 4℃預冷的 BIOHUB 無血清細胞凍存液重懸細胞，制成細胞懸液。 （按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶ 至 5x10⁶cells/mL。） 

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，建議每管 1mL 或 1.5mL。

直接將細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少 12 小時，方可移至液氮罐中長期保存。

二  凍存細胞復蘇步驟

1. 在 15 mL 離心管中加入 5-10 mL 平衡至室溫的培養基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞，立即放入 37℃水浴鍋或其他細胞復蘇設備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細胞懸液逐滴轉移至預先準備好的含培養基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心 5 分鐘，收集細胞沉淀，棄上清（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的培養基重懸細胞，接種到事先準備好的培養容器中，輕輕搖晃培養容器，使細胞分布均勻。

5. 鏡檢細胞后，可根據各自研究的需要和方法進行細胞常規培養。培養 5-24h 后，觀察細胞狀態，可視情況更換鮮細胞培養液。

實驗案例分析

1.選擇處于對數生長期的四種細胞，按照常規方法收集細胞于離心管中。

2.1000 rpm，離心 5 分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3.加入適量 4℃預冷的 BIOHUB 無血清細胞凍存液、T 公司凍存液、X 公司凍存液分別重懸細胞，制成細胞懸液。凍存密度為 1x106 cells/mL。

4.將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管 1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5.凍存 6 個月后，進行細胞復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統計細胞存活率。

細胞凍存 6 個月后復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統計細胞存活率

細胞凍存流程分解圖：

注意事項

1. 本產品可-30℃至-10℃保存，若長期不用，再次使用時，請在 2-8℃或室溫（22-25℃，不超過 4小時）融化 ；

2. 避免反復凍融；

3. 使用此無血清細胞凍存液凍存細胞后，應盡量減少凍存細胞在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存；

4. BIOHUB 無血清細胞凍存液（藥用級）含有 DMSO，部分對 DMSO 敏感的細胞、淋巴細胞或干細胞凍存，建議使用本產品對其進行試驗性凍存、復蘇、培養，確認性能后再進行正式凍存；

5. 該產品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率；

     免責聲明: 本公司將不為任何不正當使用此產品所發生的意外負責；為了您的健康安全，請規范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗；

     本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療

運輸及保存方法

保存：短期：2-8℃ 6 個月；長期-20℃保存，24 個月。

運輸：冰袋運輸。