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當前位置:首頁技術文章InGex TGIRT™-III Enzyme 說明書

InGex TGIRT™-III Enzyme 說明書

更新時間:2017-09-26點擊次數:2524

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InGex.com是Ingex有限責任公司的所在地,也是TGIRT™-III獨立酶和TGIRT™模板切換RNA-seq試劑盒的*授權銷售商。

  •  

  • TGIRT™-III Enzyme

  •  

*規格:

  •  10 Reactions (TGIRT10)
  •  50 Reactions (TGIRT50)
  •  5 x 50 µl (TGIRT5x50)
  •  10 x 50 µl (TGIRT10x50)

單位定義:

  • TGIRT的一個單元® -III逆轉錄酶(RT)活性是酶的使用聚在60℃下聚合1納摩爾的dNTP的在1分鐘(RA)所需要的量/寡(dT)42作為底物。

酶濃度:

  • 200單位/μl

酶儲存緩沖液:

  • 20mM Tris-HCl(pH7.5),500mM KCl,1mM EDTA,1mM DTT,50%甘油

酶性質和新型活性:

  • 比逆轉錄病毒逆轉錄酶更高的熱穩定性,持續性和保真度,允許從高度結構化或嚴格修飾的RNA進行全長的端到端cDNA合成。1
  • 新的端對端模板切換活動,其能夠在逆轉錄過程中連接RNA-seq或PCR適配器,并且不再需要單獨的RNA 3' - 銜接子連接步驟。1這種模板切換活動大大促進了鏈特異性RNA-seq文庫的構建,其偏倚偏差小于使用隨機六聚體引物的方法,或者使用RNA連接酶進行銜接連接。1,4,7,8
  • 退火引物有效的cDNA合成 將退火的引物應具有推測的T  > 60 ö下用在反應混合物中基板在室溫下,通過加入dNTP的反應開始30分鐘酶的建議預孵育。新應用的*條件應通過測試25至450 mM NaCl的鹽濃度范圍來確定。

酶的建議用途:

  1. 綜合股特異性轉錄組分析。8
  2. 全細胞,外來體,血漿和其他無細胞RNA的RNA-seq。7,8
  3. miRNA和其他小型非編碼RNA的分析。1,11,14
  4. 通過高通量測序鑒定RNA堿基修飾。4,5,12,13
  5. RIP-seq,HITS-CLIP,CRAC,??核糖體分析。1,9
  6. 使用諸如SHAPE和DMS修飾之類的方法進行RNA結構映射。1,15
  7. 長cDNA的合成 1
  8. RT-qPCR的。1
  9. 用于表征RNA-蛋白質相互作用的irCLIP。9
  10. DMS-MaPseq用于全基因組或靶向RNA結構體內探測。15
  11. FFPE腫瘤樣本分析(咨詢InGex)
  12. 通過TGIRT®模板切換的單鏈DNA-seq(參見InGex)

酶的優點:

  1. 綜合轉錄組分析比傳統方法更少的偏差。

    根據zui近的出版物,核糖核酸裂解的片段化通用人參考RNA樣品的TGIRT-seq 概括了與非鏈特異性TruSeq v2相比較的人轉錄本和尖峰的相對豐度,優于鏈特異性Tru-Seq v3。TGIRT®-seq比TruSeq v3顯著更強的鏈特異性,并消除TruSeq固有的隨機六聚體啟動的取樣偏差。TGIRT®-seq顯示更均勻的5'至3'基因覆蓋,并識別比TruSeq更多的剪接點。TGIRT®-seq可以在與結構化小ncRNA(包括tRNA)相同的RNA序列中同時進行mRNA和mRNA的分析,這些tRNA基本上不存在于TruSeq數據集中。8

  2. 全細胞,外來體,血漿和其他細胞外RNA的RNA-seq。

    快速處理時間(通過PCR步驟對RNA-seq文庫構建<5小時); 需要少量RNA(低ng范圍); 全面的轉錄譜,包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA,包括tRNAs,pre-miRNAs和其他結構化小ncRNA的全長讀數; 較常規方法較少的偏差和較大的鏈特異性。7,8

  3. 比逆轉錄病毒RT更高的持續性和鏈置換活性。

    • 使用錨定寡核苷酸(dT)引物構建多聚腺苷酸化RNA的RNA-seq文庫,具有比沒有核糖核酸步驟的逆轉錄病毒RT更均勻的5'至3'覆蓋率。1
    • 通過基于毛細管電泳的方法,如SHAPE或DMS結構圖,通過顯著的長度讀取長度和比逆轉錄病毒RT更少的過早停止來實現RNA結構測繪。1
    • 使得可以獲得tRNA和其他小的ncRNA的全長的端到端cDNA,這些cDNA對于逆轉錄病毒RT是難治的。4-7
  4. 通過TGIRT®模板切換的RNA-seq文庫構建,如miRNA分析,RIP-seq,HITS-CLIP,CRAC,??核糖體分析等方法。

    快速處理時間(通過PCR步驟對RNA-seq文庫構建<5小時); 需要少量RNA(低ng范圍); 不需要RNA連接酶,通過在該過程中具有較少的步驟,偏倚較小并且更有效。

參考文獻:

    1. Mohr,S.,Ghanem,E.,Smith,W.,Sheeter,D.,Qin,Y.,King,O.,Polioudakis,D.,Iyer,VR,Hunicke-Smith,S.Swamy, Kuersten,S.and Lambowitz,AM Thermostable group II intron reverse transcriptase fusion proteins and their use in cDNA synthesis and next generation RNA sequencing。RNA 19,958-970,2013。
    2. Collins,K。和Nilsen,T. Enzyme engineering through evolution:熱穩定重組II內含子逆轉錄酶為RNA研究和生物技術提供了新的工具。RNA 19,1017-1018,2013。
    3. Enyeart,PJ,Mohr,G.,Ellington,AD和Lambowitz AM移動組II內含子及其逆轉錄酶的生物技術應用:基因靶向,RNA-seq和非編碼RNA分析。 DNA 5:2,2014。
    4. Katibah,GE,Qin,Y.,Sidote,DJ,Yao,J.,Lambowitz,AM和Collins,K.Ban and adaptability RNA structure recognition by the human interferon-induced tetratricopeptide repeat protein IFIT5。PROC。國家科??茖W院??茖W。,USA,  111,12025-12030,2014。  
    5. Shen,PS,Park,J.,Qin,Y.,Li,X.,Parsawar,K.,Larson,MH,Cox,J.,Chen,Y.,Lambowitz,AM,Weissman,JS,Brandman,O. ,和Frost,A.Rqc2p和60S核糖體亞基介導新生鏈的mRNA非依賴性伸長。科學347,75-78,2015年。
    6. Zheng,G.,Qin,Q.,Clark,WC,Yi,C.,He,C.,and Lambowitz,AMand Pan,T.Efficient and quantitative high-throughput transfer RNA sequencing。Nature Methods,12,835-837,2015。
    7. Qin,Y。,Yao,J。,Wu,D。,Nottingham,R.,Mohr,S,Hunicke-Smith,S.,Lambowitz,AM,High-throughput sequencing of human plasma RNA by using thermostable group II intron reverse酶。RNA 22,111-128,2016。
    8. Nottingham,RM,Wu,DC,Qin,Y.,Yao,J.,Hunicke-Smith,S.,and Lambowitz,AM RNA-seq of human reference RNA samples using a thermostable group II intron reverse transcriptase。RNA,22,597-613,2016。
    9. Zarnegar,BJ,Flynn,RA,Shen,Y.,Do,BT,Chang,HY和Khavari,PA irCLIP platform for characterization of protein-RNA interactions。Nature Methods 13,489-492,2016。
    10. Haque,N.和Hogg,JR更容易,更好,更快,更強:改進的RNA-蛋白質相互作用研究的方法,Mol。Cell,2016 http //dx.doi.org/10.1016/j.molcel.2016.05.019
    11. Bazzini,AA,del Viso,F.,Moreno-Mateos,MA,Johnstone,TG,Vejnar,CE,Qin,Y.,Yao,J.,Khokha,MK和Giraldez,AJ Codon identity regulates mRNA stability and translation efficiency在產婦到合子過渡期間。EMBO J. 35,2087年至2103年,2016。
    12. Clark,WC,Evans,ME,Dominissini,D.,Zheng,G.and Pan,T.tRNA base methylation identification and quantification via high-throughput sequencing。RNA 22,1771年至1784年,2016。
    13. Liu et al。ALKBH介導的tRNA去甲基化調節翻譯。細胞167, 816-828,2016年,
    14. Burke,JM,Kincaid,RP,Nottingham,RM,Lambowitz,AM和Sullivan,CS DUSP11對三磷酸化轉錄物的活性促進Argonaute與非病毒性病毒微小RNA的結合并調節細胞非編碼RNA的穩態水平。基因與發育30,2076年至2092年,2016年
    15. Zubradt,M.,Gupta,P.,Persad,S.,Lambowitz,AM,Weissman,JS和Rouskin,S.DMS-MaPseq for genome-wide or targeted RNA structure probing in vivo。自然方法10.1038 / nmeth.4057,2016。

 

相關產品報價如下:

貨號 品名 規格 價格  品牌 
TGIRT10TGIRT™-III Enzyme10 ul2958 InGex
TGIRT50TGIRT™-III Enzyme50 ul9758 InGex
TGIRT 5 x 50TGIRT™-III Enzyme5 x 50 ul44115 InGex
TGIRT 10 x 50TGIRT™-III Enzyme10 x 50 ul83997 InGex

 

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